石斑魚病毒性神經壞死病的病原分離和鑒定

摘要：對福建省漳州市某水產養殖場發生的疑似病毒性神經壞死病的病魚進行病原分離和鑒定.從出現疑似病毒性神經壞死病癥狀的石斑魚苗上取眼部、腦部組織進行研磨,將勻漿液接種到條紋月鱧細胞系(SSN)細胞株SSN-1及其克隆細胞株E-11,兩株細胞均出現明顯的細胞病變,細胞腫脹變圓,呈空泡化并脫落,E-11細胞較SSN-1細胞更早出現細胞病變,且病變更明顯.將病魚眼部、腦部組織的研磨液、細胞培養上清進行RT-PCR檢測,均檢測出病毒性神經壞死病病毒(VNNV)的特異性條帶,目的片段大小為427bp,序列比對結果提示該病原為赤點石斑魚神經壞死病毒(RGNNV).電鏡觀察結果顯示,細胞培養上清中存在直徑約30nm的病毒顆粒,細胞質內大量病毒顆粒聚集成團,細胞器受損,細胞結構被破壞.將分離得到的VNNV進行溫度、酸堿度敏感性試驗,結果顯示:50℃下處理30min后該病毒滴度明顯下降,60℃處理30min后病毒失活;在pH為3、11的條件下病毒滴度均明顯下降.