山羊偽結核棒狀桿菌的分離鑒定及耐藥性分析

摘要：【目的】分離、鑒定福建省某養殖場病死山羊的病原,明確山羊病死原因,為山羊偽結核棒狀桿菌病的防治提供科學依據?！痉椒ā恳詿o菌采集的病羊肺臟為材料,進行細菌分離純化,鑒定分離菌株的形態特征及培養特性;提取菌株DNA,利用特異性引物和16S rRNA通用引物進行PCR,16S rRNA擴增片段送公司進行克隆測序并對序列進行分析;并進行生化、藥敏和動物攻毒試驗?！窘Y果】該分離菌株在含10%脫纖維綿羊血的瓊脂培養基上,生長成直徑1 mm左右、中央凸起、乳白色、邊緣不整齊、伴有β溶血環的菌落,在營養瓊脂培養基上生長不良,在麥康凱瓊脂培養基上不能生長。16S rRNA測序結果經NCBI在線軟件Blast后顯示與GenBank上的偽結核棒狀桿菌的同源性高達100%;山羊偽結核棒狀桿菌特異性PCR有目的擴增條帶;生化試驗結果與伯杰氏細菌鑒定手冊中偽結核棒狀桿菌相符,表明分離菌為山羊偽結核棒狀桿菌,命名為FJ-PN。小鼠攻毒試驗結果顯示,小鼠腹腔與皮下注射0.3 mL含量為4×10^5 CFU·mL^-1的分離菌,在40 h內全部死亡;山羊攻毒試驗結果顯示,山羊經皮下注射2 mL、鼻腔接種1 mL含量為4×10^5 CFU·mL^-1的分離菌3 d后死亡。藥敏試驗結果顯示該菌對克拉霉素、環丙沙星、青霉素、四環素、左氟沙星、氧氟沙星、慶大霉素高度敏感,對紅霉素、氯霉素、氨芐西林、頭孢噻肟、頭孢西丁、利福平低度敏感,對鏈霉素、甲氧芐啶表現耐藥?！窘Y論】本研究分離到的1株細菌為山羊偽結核棒狀桿菌,具有較強的致病性,且對抗生素表現出一定的耐藥性,為該病的診斷和合理用藥提供了理論支持。