三角褐指藻PtCryP基因的克隆及敲除載體構(gòu)建

摘要：文章旨在獲得三角褐指藻中隱花色素PtCryP的全長序列并進(jìn)行生物信息分析,且利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)的pKS diaCas-sgRNA質(zhì)粒,通過質(zhì)粒酶切、引物退火、連接重組質(zhì)粒,成功構(gòu)建了三角褐指的敲除載體,并通過DNA測序確定插入了sgRNA序列。PtCryP基因的開放閱讀框全長為1575 bp,編碼524個(gè)氨基酸,預(yù)測的等電點(diǎn)8.30,理論分子量58.98 kD。通過結(jié)構(gòu)域分析,隱花色素蛋白的典型結(jié)構(gòu)域存在于PtCryP蛋白中。本研究首次構(gòu)建了三角褐指藻PtCryP的CRISPR/Cas9敲除載體,為下一步三角褐指藻CryP的表達(dá)和功能研究奠定基礎(chǔ)。