LV-EGFP標記兔角膜基質細胞體外基質層移植的實驗觀察

摘要：目的:探討兔角膜基質細胞(CSCs)體外移植兔角膜后的存活時間。方法:體外培養原代兔CSCs,并行細胞免疫組化鑒定,利用慢病毒載體(LV)攜帶標記基因增強型綠色熒光蛋白(EGFP)轉染兔CSCs,倒置熒光顯微鏡下觀察轉染后細胞生長狀態及熒光強度,體外動物實驗,隨機分為2組,實驗組行LV-EGFP標記的兔CSCs細胞懸液角膜基質注射,對照組等量生理鹽水角膜基質注射,轉染后1wk,1mo取材冰凍切片觀察移植的CSCs熒光,石蠟切片行蘇木素-伊紅(HE)染色觀察組織形態。結果:LV-EGFP轉染兔CSCs在倒置熒光顯微鏡下24h后可見少量熒光,96h和110h熒光較強,轉染后的CSCs與正常CSCs細胞形態無明顯差異;轉染后1wk,1mo實驗組中角膜基質層中可見綠色熒光,對照組中無綠色熒光;石蠟切片1wk實驗組見明顯上皮細胞增生及角膜輕微水腫,少量炎癥細胞浸潤,轉染后1mo實驗組上皮細胞增生減弱,未見角膜層水腫;對照組1wk,1mo均未見明顯異常。結論:LV-EGFP標記的兔CSCs行體外角膜基質移植,可在角膜中至少存活1mo,且與鄰近組織相容性較好。