應用FTA／PCR檢測糞便中隱孢子蟲的實驗研究

摘要：目的建立用FTA／PCR檢測糞便中隱孢子蟲的技術，并與常用的商業化的糞便DNA抽提試劑盒進行比較。方法選擇經病原學檢測已經確診的隱孢子蟲陽性和陰性糞便，分別采用FTA卡和商業化DNA抽提試劑盒抽提糞便樣本中DNA，進行巢式PCR擴增，對PCR陽性產物進行測序并利用BLAST在NCBI上與GenBank數據庫進行比對，做同源性分析，確定蟲種。結果應用商業化DNA抽提試劑盒抽提DNA，無論是否反復凍融破壁，2個陽性對照樣本擴增出目的片段，另3個陽性樣本未擴增出特異性條帶。樣本純化后應用FTA卡抽提DNA進行PCR檢測，所有陽性糞樣均擴增出830bp左右的目的片段，通過測序和比對，其中2個為貝氏隱孢子蟲，1個為火雞隱孢子蟲。結論應用FTA進行糞便樣本中隱孢子蟲DNA的抽提方法具有簡單有效、快速靈敏、準確可靠等特點，可以應用于糞便中隱孢子蟲的檢測。