環(huán)糊精水解酶cds1-3底物通道氨基酸的定點(diǎn)突變研究

摘要：本研究對(duì)具有大分子水解能力的環(huán)糊精水解酶cds1-3的蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,選取底物通道相關(guān)氨基酸進(jìn)行定點(diǎn)突變。通過(guò)比較突變酶和野生酶的功能差異,定位決定cds1-3特殊功能的氨基酸。采用sybyl 1.2進(jìn)行蛋白質(zhì)底物結(jié)合分析,選取和多聚體形成、底物結(jié)合以及底物通道相關(guān)的氨基酸Glu66、Pro48、Phe289為突變位點(diǎn),反向PCR構(gòu)建pSE380/E66G、pSE380/P48H、pSE380/F289A表達(dá)質(zhì)粒并進(jìn)行表達(dá),獲得酶活突變體并與原始酶進(jìn)行底物特異性比較分析。其結(jié)果顯示,突變酶E66G降解大分子底物木薯淀粉和支鏈淀粉的相對(duì)酶活力分別提高26.96%和23.15%,而對(duì)小分子底物普魯蘭糖的水解能力下降13.14%。因此,cds1-3是一個(gè)能水解大分子底物的特殊環(huán)糊精水解酶,氨基酸Glu66是cds1-3水解大分子支鏈淀粉的關(guān)鍵氨基酸之一。