缺氧缺糖海馬神經(jīng)元模型最佳造模時(shí)間的選擇

摘要：目的：建立可靠合理的海馬神經(jīng)元缺氧缺糖（OGD）模型。方法：用培養(yǎng)5 d的海馬神經(jīng)元細(xì)胞,采用三氣培養(yǎng)箱聯(lián)合EBSS液,進(jìn)行OGD造模;于培養(yǎng)0.5、1、2及3 h時(shí)收集海馬神經(jīng)元細(xì)胞,倒置顯微鏡下觀察海馬細(xì)胞的形態(tài),并采用MTT法通過(guò)檢測(cè)海馬細(xì)胞的吸光度（OD）值繪制海馬神經(jīng)元OGD損傷時(shí)效曲線,篩選海馬神經(jīng)元OGD最佳造模時(shí)間。結(jié)果：倒置顯微鏡下可見隨著OGD時(shí)間的延長(zhǎng),神經(jīng)元細(xì)胞受損越嚴(yán)重,生長(zhǎng)狀態(tài)越差,胞體從正常的飽滿圓潤(rùn),折光性、立體感強(qiáng),神經(jīng)元細(xì)胞軸突長(zhǎng),形狀粗壯,數(shù)量多,與樹突相互交集呈網(wǎng)絡(luò)狀;細(xì)胞貼壁牢固,變成大部分神經(jīng)元胞體與自身軸突、樹突連接斷裂,有的胞體,細(xì)胞直接從培養(yǎng)板壁上脫落,脫落的細(xì)胞堆積在一起;從海馬神經(jīng)元OGD損傷時(shí)效曲線可發(fā)現(xiàn)前5 d海馬神經(jīng)元生長(zhǎng)迅速,第5天到達(dá)高峰期,第5~7天為平臺(tái)期,第8天后活力稍下降;與OGD 0 h（正常）OD值比較,OGD 0.5、1、2及3 h的OD值減低（P〈0.05）,表明所采用的OGD造模方法是成功的,OGD 2 h時(shí)細(xì)胞的損傷程度為正常細(xì)胞組30%,可作為正式實(shí)驗(yàn)OGD模型。結(jié)論：三氣培養(yǎng)箱聯(lián)合EBSS液可進(jìn)行體外OGD造模,最佳的細(xì)胞模型為培養(yǎng)2 h。