假單胞菌593多銅氧化酶CopA的漆酶活性研究

摘要：從假單胞菌593中克隆出多銅氧化酶 copA 基因,并將其轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3) pLysS 過量表達和純化.純化的CopA蛋白展示出漆酶活性,針對漆酶的3種底物ABTS、DMP、SGZ,CopA的最適反應(yīng)pH分別是3.5、7.5和 7.5,最適反應(yīng)溫度分別是50 ℃、50 ℃和42 ℃.pH穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定研究發(fā)現(xiàn),在pH 7.0條件下,CopA比較穩(wěn)定,在溫度大于42 ℃保存該蛋白,其活性降低較快.二價金屬離子影響實驗發(fā)現(xiàn),CopA漆酶活性能被二價銅離子顯著加強.酶動力學(xué)常數(shù)實驗結(jié)果展示,CopA作用于底物ABTS, Km為0.281 mmol/L,V max 為3.02×10^-3 mmol·L^-1·min^-1 ,k cat 為1.8 s^-1;CopA作用于底物DMP, K m為0.141 mmol/L,V max 為4.54×10^-3 mmol·L^-1·min^-1,k cat 為2.2s^-1;CopA作用于底物SGZ,K m為0.025 mmol/L,V max 等于0.7×10 ^-3 mmol·L^-1·min^-1,k cat 為0.87 s^-1 .