黑木耳內切葡聚糖酶基因克隆與原核表達

摘要：克隆了黑木耳(Auricularia auricular-judae)內切葡聚糖酶(endoglucanase)基因并進行序列分析,此外,在大腸桿菌BL21(DE3)中成功表達。研究基于前期測得的黑木耳轉錄組數(shù)據(jù),同時結合基因組數(shù)據(jù)(GenBank登錄號為NEKD00000000.1),篩選到黑木耳內切葡聚糖酶基因序列并設計特異引物,以黑木耳菌絲總RNA為模板,采用RT-PCR技術克隆黑木耳內切葡聚糖酶基因cDNA全長,命名為Aa-eg,構建了重組原核表達載體pET32a-Aa-eg并成功在大腸桿菌中表達。序列分析表明,cDNA全長為1242bp,編碼413個氨基酸,預測該蛋白分子量為43.59ku,理論等電點為4.42,存在信號肽。由于pET-32a載體包含20.0ku的標簽,SDS-PAGE分析在45.0ku和66.2ku之間出現(xiàn)目的蛋白條帶,與理論預期值大小一致。通過對黑木耳內切葡聚糖酶基因的克隆及分析,為進一步揭示黑木耳內切葡聚糖酶基因功能奠定基礎。