配對盒基因6/小鼠胚胎干細胞細胞系的建立及干細胞生物學特性分析

摘要：目的建立配對盒基因6(Pax6)/小鼠胚胎干細胞(m ESCs)細胞系并鑒定其干細胞生物學特性。方法體外培養m ESCs,將重組載體p EF1α-Pax6-IRES-AcGFP和空載體p EF1α-IRES-AcGFP分別用脂質體法轉染m ESCs,經G418梯度及熒光蛋白雙篩選后,使用細胞免疫熒光染色、免疫印跡法及RT-PCR技術檢測Pax6的表達情況,流式細胞術檢測Pax6/m ESCs陽性細胞的比例。將獲得正確的細胞系分別采用細胞免疫熒光染色對其干細胞標志物階段特異性胚胎抗原1(SSEA1)、八聚體結合轉錄因子4(OCT4)進行檢測,堿性磷酸酶(AP)染色法對其多能性進行檢測,流式細胞術檢測增殖指數Ki67。將Pax6/m ESCs進行腎背囊下移植,移植物行HE染色觀察其分化能力。結果 Pax6成功在m ESCs內表達,經G418篩選后,獲得Pax6/m ESCs細胞系,流式結果顯示,Pax6陽性率為90%,免疫熒光顯示,干細胞標志物SSEA1、OCT4表達陽性且AP染色陽性,并且在體內移植后能向3個胚層分化。結論 Pax6成功在m ESCs內表達,經G418篩選后,獲得細胞系Pax6/m ESCs并維持良好的干細胞特性。