從異位子宮內膜分離獲得的內膜干細胞的生物學特點

摘要：目的建立子宮內膜異位癥(內異癥)患者異位病灶來源子宮內膜干細胞(En SCs)的分離培養及鑒定方法,并對所分離細胞的生物學特性進行檢測,為研究En SCs在內異癥發病機制中的潛在作用提供支持。方法收集臨床內異癥患者異位病灶內膜組織樣本,機械剪碎后Ⅰ型膠原酶消化,分離獲得異位En SCs,常規培養傳代(n=10);免疫熒光檢測細胞波形蛋白(vimentin)的表達(n=3);MTT法檢測細胞增殖活性(n=5);成脂成骨誘導檢測細胞多向分化潛能(n=3),流式細胞儀檢測細胞表面標志物(n=3);蛋白芯片檢測細胞條件培養基中促血管再生因子及相關炎癥因子的分泌(n=6),同時檢測細胞表面相關黏附分子的表達(n=7)。結果成功從異位病灶中分離獲得異位En SCs,所分離細胞強陽性表達骨架蛋白vimentin,且細胞陽性表達間充質干細胞表面標志物CD29、CD73、CD90及CD105,陰性表達造血干細胞表面標志物CD34和CD45;經成脂誘導分化后油紅O染色可見明顯脂滴,成骨誘導分化后茜素紅染色可見明顯鈣結節;蛋白芯片檢測結果表明,異位En SCs能夠分泌高濃度的促血管再生因子血管內皮生長因子(VEGF)、血管緊張素(ANG)及血小板衍生生長因子(PDGF)-AA,以及與促血管再生密切相關的炎癥因子白細胞介素(IL)-6、IL-8和單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1),且細胞表面高表達活化白細胞黏附分子(ACLAM)和細胞間黏附分子-1(ICAM-1)。結論本研究成功建立內異癥患者異位病灶來源En SCs的分離培養及鑒定方法;對其活性因子分泌的研究表明,異位En SCs具有明顯的促血管再生作用。上述實驗結果肯定了內異癥患者異位病灶中干細胞的存在,在支持內異癥發病機制中"干細胞學說"的同時,為進一步圍繞異位En SCs開發潛在的內異癥治療靶點提供可能。