雜交鵝掌楸LhARF2基因啟動(dòng)子的克隆及瞬時(shí)表達(dá)分析

摘要：生長(zhǎng)素響應(yīng)因子(Auxin response factor,ARF)參與調(diào)控植物生長(zhǎng)發(fā)育的多個(gè)途徑。本研究利用Tail-PCR技術(shù)從雜交鵝掌楸中克隆LhARF2基因5'端上游2637bp序列,即pLhARF2啟動(dòng)子,并利用生物信息學(xué)軟件PlantCARE分析其包含的調(diào)控元件,發(fā)現(xiàn)其含有啟動(dòng)子必需元件TATA-box和CAAT-box,以及壓力響應(yīng)、激素響應(yīng)、光信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和代謝循環(huán)過程元件。構(gòu)建pLhARF2-pCAMBIA1300:GUS植物表達(dá)載體并瞬時(shí)浸染本氏煙草葉片,利用GUS組織化學(xué)染色法鑒定煙草葉片中瞬時(shí)表達(dá)活性,發(fā)現(xiàn)在煙草葉片中有藍(lán)色斑塊,但顏色較淺。實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)雜交鵝掌楸pLhARF2啟動(dòng)子可以調(diào)控GUS基因活性,為下一步研究啟動(dòng)子遺傳轉(zhuǎn)化的組織表達(dá)活性奠定了基礎(chǔ)。