轉基因誘導永生化雞細胞系的建立

摘要：傳統上從雞胚中分離病毒用于疫苗的生產常常不能滿足需求,研究從體外培養的細胞中分離病毒的途徑成為當前疫苗生產領域的迫切需要。本研究利用體細胞誘導重編程技術建立永生化細胞系,為應用于疫苗制備等研究和生產奠定基礎。通過慢病毒載體轉染轉錄調控因子(NANOG, LIN28和C-MYC)重編程雞成纖維細胞,并穩定培養至100代,獲得永生化的細胞,而后逐步去除細胞因子、血清等添加物,優化細胞系培養體系,并對細胞馴化實現懸浮生長,以獲得單位體積最大密度的細胞。研究結果表明:通過轉基因將NANOG,LIN28和C-MYC 3個因子整合入細胞中表達,細胞系對堿性磷酸酶染色呈陽性反應,端粒逆轉錄酶(cTERT)基因在細胞系中顯著上調,并穩定培養至100代,使得這些細胞具有自我更新特性和永生化的潛能。確定了培養基中的血清替代物KSR濃度為20%,并撤除了培養基中bFGF等生長因子,為細胞大規模培養應用提供了可能。永生細胞實現懸浮生長,細胞生長倍增時間為21.71 h,最大密度為1.3×106 cells/m L。因此,我們通過重編程技術建立了一株穩定的永生化細胞系,并且使它能在低濃度KSR中懸浮培養,這為疫苗制備等研究和生產提供科學依據。