催化槲皮素生成異鼠李素的重組菌構建及其轉化條件優化

摘要：異鼠李素是一種黃酮類化合物,廣泛存在于銀杏、沙棘、旱柳和枸杞等植物中,具有多種藥理作用。植物來源的O-甲基化酶能對槲皮素羥基進行甲基化,因而構建重組菌高效表達O-甲基化酶可應用于催化槲皮素生成異鼠李素。筆者對大豆來源的O-甲基化酶SOMT-9編碼基因進行了密碼子優化,其密碼子適應指數（CAI）從優化前的0.59,提高為0.87。將優化后的基因SysOMT-9插入表達載體pGEX-2T,構建獲得重組質粒pGEX-SysOMT。將重組質粒轉化大腸桿菌BL21（DE3）,通過改變誘導溫度及誘導劑濃度,實現了SOMT-9可溶性表達。在此基礎上對其轉化條件進行了優化,其最佳轉化條件為：起始菌量OD600為10,轉化溫度為30℃,誘導劑IPTG用量為0.01mmol/L,助溶劑DMSO質量分數為1%,1%甘油,40μmol/L的S-腺苷基甲硫氨酸和1mmol/L槲皮素。在此條件下,重組菌在12h內,可將127mg/L的槲皮素,轉化生成133mg/L異鼠李素,摩爾轉化率為42%,是優化前的7.8倍。