斜紋夜蛾氣味結(jié)合蛋白基因GOBP2轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)的克隆及活性分析

摘要：[目的]本文旨在鑒定重要農(nóng)業(yè)害蟲斜紋夜蛾(Spodoptera litura)氣味結(jié)合蛋白基因GOBP2的順式作用元件,為揭示GOBP2的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制和開發(fā)基于嗅覺干擾的害蟲防治技術(shù)奠定基礎(chǔ)。[方法]利用5′RACE技術(shù)克隆GOBP2的5′UTR,確定轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn);利用染色體步移技術(shù)(chromosome walking)克隆GOBP2的5′側(cè)翼區(qū),并利用在線網(wǎng)站預(yù)測轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn);利用PCR克隆GOBP2的5′側(cè)翼區(qū)逐步缺失片段,并構(gòu)建到pGL3-Basic載體上;將各重組載體分別轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞,48 h后收獲細(xì)胞并利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測轉(zhuǎn)錄活性。[結(jié)果]獲得斜紋夜蛾GOBP2長23 bp的5′UTR,由此確定GOBP2的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)。通過染色體步移獲得斜紋夜蛾GOBP2的5′端調(diào)控區(qū)2 025 bp的序列,發(fā)現(xiàn)啟動(dòng)子的典型TATA框;針對-1 000 bp序列的轉(zhuǎn)錄活性分析表明,最強(qiáng)轉(zhuǎn)錄活性區(qū)域位于-243~-207 bp,具有1個(gè)增強(qiáng)子;此外,在-971~-891 bp及-890~-811 bp各有1個(gè)增強(qiáng)子,在-244~-315 bp存在1個(gè)沉默子。[結(jié)論]獲得斜紋夜蛾GOBP2的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)及順式作用元件,為進(jìn)一步研究GOBP2的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。