禽腺病毒4型Fiber2蛋白表達、純化及多克隆抗體的制備

摘要：自2015年以來,國內雞(Gallus domesticus)群因禽腺病毒4型(Fowl adenovirus serotype 4, FAdV-4)感染引起的包涵體肝炎、心包積液的病例呈逐年上升趨勢。為制備反應原性良好的FAdV-4血清學診斷抗原,本研究根據密碼子優化后的FAdV-4 Fiber2全基因合成序列進行了體外擴增,再將其克隆入p Cold表達載體,構建原核表達載體pCold-Fiber2。pCold-Fiber2重組質粒轉化至大腸桿菌(Escherichia coli) PGTf2感受態細胞,經異丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalac toside, IPTG)誘導表達后純化Fiber2蛋白,用該蛋白免疫家兔(Oryctolagus cuniculus),成功制備了抗FAdV-4 Fiber2蛋白多克隆抗體。Western blot和間接免疫熒光試驗(indirected immunofluorescence assay, IFA)結果表明,抗FAdV-4 Fiber2蛋白多克隆抗體純化后可與Fiber2蛋白和FAdV-4發生特異性反應,證明Fiber2蛋白具有良好的免疫原性。建立的FAdV-4抗體間接ELISA檢測方法顯示該方法檢測靈敏性為96%,特異性為100%。本研究成功制備了具有良好Western blot和IFA反應原性的多克隆抗體,建立了FAdV-4抗體間接ELISA檢測方法,該方法反應特異性好、靈敏度高、操作簡單、反應結果穩定可靠,適用于雞群抗體水平的監測、評估和發現早期隱性感染,為研制FAdV-4的血清學診斷技術和防控該病提供了基礎資料。