金錢魚鰓細胞系的建立及其生長特性的初步研究

摘要：鰓是魚類滲透壓調節的主要器官,鰓細胞的培養技術的建立可以為魚類滲透壓調節機理研究提供重要的實驗手段和研究方法。金錢魚(Scatophagus argus)作為一種廣鹽性魚類,是研究滲透壓調節機制的理想動物模型。本研究采用胰蛋白酶消化法進行了金錢魚鰓細胞的體外培養,確定該類細胞原代和傳代培養的最優條件,分析了其生長特性。結果表明,金錢魚鰓細胞系在28℃,含有20%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的L-15培養基中生長最佳,2~4d即可傳代,傳代后可穩定培養,命名為SG。在傳代培養過程中,對其增殖情況進行分析,發現SG細胞群體倍增時間為40.8h。正常傳代的SG細胞凍存、復蘇后,經臺盼藍染色測得細胞存活率約為87%。鰓細胞直接同水體環境接觸,具有高效的滲透壓調節能力。環境鹽度變化時,鰓細胞啟動滲透壓脅迫應答機制,維持內環境穩態。本研究對SG細胞進行滲透壓刺激后,檢測其增殖情況并觀察形態變化。分析表明,SG細胞在分別為150和600mOsmol·kg^–1的低滲和高滲脅迫后均可增殖,且低滲脅迫后的增殖速度是高滲脅迫的1.5倍。滲透壓脅迫后SG細胞的形態觀察結果顯示,低滲培養基脅迫后細胞體積發生膨脹而高滲條件下細胞體積發生皺縮。由此推斷SG細胞具有較強滲透壓耐受性,且低滲耐受能力強于高滲。SG細胞系的建立為金錢魚滲透壓應答機制和相關基因功能的研究提供了基礎實驗材料。