載pVAX1／TatPTD—endostatin殼聚糖納米基因載體的構建與體外活性評價

摘要：目的構建載內(nèi)皮抑素（Es）重組表達質粒的殼聚糖納米基因載體并評價其抑制內(nèi)皮細胞增殖的活性。方法選用真核表達質粒pVAX1為重組載體，采用PCR及雙酶切法制備能夠表達TatPTD—Es融合蛋白的真核表達栽體pVAXI／TatPTD—Es；離子交聯(lián)法制備殼聚糖載基因納米粒，瓊脂糖凝膠電泳篩選處方，檢測納米粒的形態(tài)、Zeta電位及粒徑；采用最佳處方比例制備載重組質粒納米載體，轉染人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC，采用ELISA法測定分泌型TatFFD—Es蛋白的表達量，CCK-8法測定對HUVEC的抑制作用，以上兩個實驗均以Lipofecta．min^TM2000為陽性對照。結果pVAX1／TatPTD—Es的真核表達載體構建成功，殼聚糖納米粒Zeta電位（14．3±1．6）mV，粒徑（145±12）nm，納米粒轉染HUVEC后細胞上清中TatPTD—Es的濃度為（182．5±16．3）ng／mL，殼聚糖基因載體轉柒HUVEC后對細胞有明顯的抑制作用，72h的抑制率達（53．4±5．4）％（Z=-2．611，P=0．008）。結論構建的殼聚糖納米基因載體能夠成功轉染HUVEC并能明顯地抑制內(nèi)皮細胞的增殖。