噬菌體抗體庫技術篩選抗VEGF165單克隆抗體

摘要：目的:獲得抗血管內皮生長因子165(VEGF165)單克隆抗體,并對其功能進行初步驗證。方法:利用噬菌體抗體庫展示技術篩選與VEGF165結合的噬菌體克隆并測序,以測序正確的陽性克隆質粒為模板,PCR擴增抗體的輕重鏈可變區基因,并克隆至哺乳動物細胞表達載體中,構建全抗體表達載體;將全抗體表達載體轉染293E細胞,收取培養細胞上清,利用ProteinA親和純化抗體;通過結合ELISA、表面等離子共振檢測抗體的親和力,以人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)為模型驗證抗體功能。結果:經過噬菌體抗體庫展示技術篩出1個與VEGF165特異性結合的抗體序列VG2;293E細胞表達了VG2全抗體蛋白,SDS-PAGE顯示VG2抗體純度較高;BIAcore檢測結果表明該抗體具有較高親和力(KD=0.56nmol/L),競爭抑制ELISA結果表明VG2抗體能抑制VEGF與VEGF受體(VEGFR)的結合(IC50為1.470μg/mL),進一步實驗結果表明VG2能夠抑制VEGF引起的HUVEC增殖。結論:制備了靶向VEGF165的全人源單克隆抗體VG2,該抗體具有較高的親和力,能阻斷VEGF165/VEGFR2的結合,并抑制HUVEC的增殖,可以作為潛在藥物應用于腫瘤治療。