AlphaLISA檢測金黃色葡萄球菌腸毒素E方法的建立

摘要：目的:利用AlphaLISA技術,建立新型均相檢測方法,對金黃色葡萄球菌腸毒素E(SEE)進行檢測。方法:采用2種SEE抗體建立AlphaLISA檢測方法,羊抗腸毒多克隆抗體同受體微球偶聯,SEE小鼠單克隆抗體標記生物素,并同偶聯了親和素的供體微球連接,3種組分與待測抗原形成雙抗體夾心結構,680nm的光激發供體微球產生能量,將周圍反應體系中的氧分子轉變為激發態,并將能量傳遞給受體微球,產生520~620nm的熒光,熒光信號與抗原濃度正相關。對該方法的反應體系進行優化,驗證其重復性、敏感性和特異性,并采用該方法檢測菌液上清和食品模擬樣本。結果:所建立的AlphaLISA檢測方法重復性較好,批間變異系數和批內變異系數皆小于10%;檢測SEE的靈敏度可以達到100pg/mL,并與其他幾種毒素均無交叉反應,具有較好的特異性。該方法也能夠準確地對金黃色葡萄球菌菌液上清中的SEE進行檢測,對食品模擬樣本的檢測也有較好的靈敏度。結論:建立了檢測SEE的AlphaLISA方法。該方法均相免洗,操作便捷,用時短,靈敏度更高,可對菌液上清和不同食品模擬樣本中的SEE進行檢測。