人轉運蛋白SR2的原核表達及其與HIV-1整合酶體外相互作用的檢測

摘要：人轉運蛋白SR2(TRN-SR2)與HIV-1整合酶(IN)相互作用是抗HIV治療的有效靶點,尋找和設計該靶點的高效抑制劑具有重要的臨床意義和廣闊的應用前景。因此為了開展以TRN-SR2與HIV-1IN相互作用為靶點的抑制劑篩選研究,以pGEX-2T為載體的重組質粒pGST-TRN-SR2在大腸桿菌Rosetta(DE3)中進行原核表達,并利用親和層析純化得到濃度為0.80mg/mL的重組TRN-SR2蛋白;然后采用生物膜干涉技術(BLI)進行體外檢測重組TRN-SR2蛋白與HIV-1IN的相互作用和結合情況。結果表明,重組TRN-SR2蛋白與HIV-1IN相互結合信號明顯升高,且測得平衡解離常數KD值為45.2nmol/L。最后利用均相時間分辨熒光技術(HTRF)和交叉滴定實驗確定了TRN-SR2與HIV-1IN在該靶點抑制劑篩選實驗體系中的最適反應濃度分別為20和40nmol/L。以上研究結果說明原核表達的重組TRN-SR2蛋白的活性較好且與HIV-1IN體外相互作用明顯,同時在篩選實驗體系中TRN-SR2與HIV-1IN最適濃度的確定也為后續抑制劑的篩選提供了相應的研究基礎。