大葉鐵線蓮ISSR反應體系的建立與優化

摘要：以秦嶺野生大葉鐵線蓮為試驗材料,在單因素試驗的基礎上進行L9(34)正交試驗,從而優化大葉鐵線蓮ISSR-PCR反應體系。結果顯示,在25μL反應體系中,最佳體系為1.0μL模板DNA、2.0μL Mg^2+、2.0μL dNTPs、1.0μL引物以及0.2μL Taq DNA聚合酶和18.8μL ddH2O。最佳擴增程序為:94℃預變性5 min;94℃變性50 s,47℃退火1 min,72℃延伸1 min,35個循環;72℃延伸10 min,最后4℃保存。