人CDK14基因表達(dá)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用

摘要：目的 建立一種人細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶14（CDK14）基因表達(dá)熒光定量PCR檢測(cè)方法。方法 利用Trizol法提取不同人肺癌細(xì)胞株中總RNA,以β-Actin和CDK14分別為內(nèi)參和目的基因,分別設(shè)計(jì)特異性擴(kuò)增引物,建立人CDK14基因表達(dá)熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)并評(píng)估其檢測(cè)性能。同時(shí)將其應(yīng)用于不同細(xì)胞系siRNA干擾前后的CDK14基因相對(duì)表達(dá)水平檢測(cè)。結(jié)果 經(jīng)電泳分析、熔解曲線、產(chǎn)物測(cè)序確認(rèn)人CDK14基因表達(dá)熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)已建立,其特異性良好,重復(fù)性佳（CV=7.13%）,線性范圍較寬（CDK14與β-Actin分別在Ct值范圍22.47～32.96與15.14～27.55間具有良好的相關(guān)性,r^2=0.9844。）。利用該體系檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：在HCC827 D5和H1650細(xì)胞中CDK14基因高表達(dá); 在1～3號(hào)干擾片段中,1號(hào)片段為有效片段。結(jié)論 人CDK14基因表達(dá)熒光定量PCR檢測(cè)方法已成功建立。