熒光素酶生物發光報告體系的優化及在肝癌荷瘤裸鼠模型中的應用

摘要：目的優化熒光素酶生物發光報告體系條件,提高基于熒光素酶生物發光活體成像技術在活體腫瘤研究中的檢測靈敏性和應用潛力。方法在一定數目穩定表達熒光素酶的肝癌細胞(HepG2-Luc)基礎上(固定熒光素酶量)進行體外luciferin和ATP的最佳濃度優化,以此優化條件進行荷瘤裸鼠活體成像靈敏度檢測和發光強度分析。結果Luciferin的最佳濃度是1.25mg/ml,ATP緩沖液的最佳濃度是12.5μM。活體成像實驗顯示,未使用優化體系時,將2×10^6肝癌細胞皮下注射后檢測到的光強度為484645,使用優化體系進行檢測的發光強度為1483024;對荷瘤裸鼠進行檢測時,未使用優化體系時的實驗鼠與對照鼠的信號強度比值為0.11,而優化后的比值增加為0.67,說明以此配比優化的熒光素酶報告系統能夠明顯提高裸鼠體內腫瘤的檢出靈敏度,延長發光時間。結論應用我們建立的熒光素酶生物發光報告體系優化方法可以顯著提高肝癌荷瘤裸鼠活體成像檢測的靈敏度。