三色雷蘑核糖核酸酶的分離純化和理化性質

摘要：依次采用離子交換層析(DEAE-Cellulose、CM-Cellulose和SP-Sepharose)和凝膠過濾層析(Superdex 75 HR10/300 GL)從三色雷蘑(Leucopaxillus tricolor)子實體中分離純化得到一種核糖核酸酶(Ribonuclease,RNase)。該酶比活為1406 U/mg,純化倍數為154,通過HPLC-LTQ-Orbitrap測序得到4條肽段序列,分別為DMAVSYLSR、IGLSSIPR、ILGRFVVDTYK和SGKANAATPK。該核糖核酸酶的相對分子質量為15000,最適反應pH為 9.0,最適反應溫度為40 ℃,熱穩定性高,80 ℃孵育1 h后能保持90%以上的活性:Cu^2+、Ca^2+、Mn^2+、Cd^2+和Al^3+在1.25~10 mmol/L濃度下對該酶活性具有抑制作用,且抑制作用隨著金屬離子濃度的升高而變強;Fe^2+在1.25~5 mmol/L的濃度下,Pb^2+、Zn^2+、Mg^2+、Hg^2+、Fe^3+在1.25~2.5 mmol/L 的濃度下對該酶的活性有促進作用。