沈陽市番茄褪綠病毒與番茄黃化曲葉病毒復合侵染的分子鑒定

摘要：在遼寧省沈陽市遼中設施蔬菜產區采集到疑似感染番茄褪綠病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)和番茄黃化曲葉病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)的番茄樣品,利用ToCV的特異性引物ToC5/ToC6進行RT-PCR檢測,結果從4份病樣中檢測到ToCV預期大小的特異片段。利用ToCV外殼蛋白(coat protein, CP)和熱激蛋白(heat shock protein 70, HSP70)基因的特異性引物進行CP基因和HSP70基因擴增及序列測定,結果得到ToCV遼中分離物CP基因和HSP70基因全長分別為774bp(GenBank登錄號:MF278016)和1665bp(GenBank登錄號:MF278017),序列分析結果表明ToCV遼中分離物的CP核苷酸序列與北京ToCV分離物(KC887999)和河北的ToCV分離物(KP217196)的CP 核苷酸序列的相似性最高,均為99.87%;HSP70核苷酸序列與山東ToCV分離物(KC709510)的HSP70核苷酸序列的相似性最高,為99.76%。同時該樣品利用背靠背引物TY-F/TY-R對TYLCV的DNA-A分子進行全基因序列擴增及序列測定,結果得到TYLCV遼中分離物的DNA-A分子全基因長度為2784 bp,序列分析結果表明TYLCV遼中分離物與山東TYLCV分離物(GU199587)的DNA-A分子全基因核苷酸序列的相似性為99.64%。從而證實了沈陽市遼中區的番茄受到ToCV與TYLCV復合侵染。