基于線粒體細胞色素C氧化酶Ⅰ基因序列的細胞種屬鑒別及細胞交叉污染分析

摘要：目的建立一種快速、簡便、敏感和特異的基于線粒體細胞色素C氧化酶I(cytochrome C oxidase subunit I,CoI)基因序列的細胞基質檢測方法,用于細胞種屬鑒別和不同種屬間的細胞交叉污染分析。方法①提取非洲綠猴腎細胞(Vero細胞)、狗腎細胞(MDCK細胞)和牛腎細胞(MDBK細胞)基因組DNA,以PCR擴增相應細胞的線粒體CoI基因保守區的基因條碼序列,將擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳檢測其基因片段的大小,并與文獻報道的來源于ATCC相應細胞系線粒體CoI基因保守區的基因條碼序列片段大小進行對比,以確定細胞的種屬類別;②用Vero細胞、MDCK細胞和MDBK細胞的線粒體CoI基因保守區的基因的特異性引物分別與相應細胞和其他不同種屬的細胞的基因組DNA進行PCR擴增,檢測方法的特異性;用不同濃度的細胞基因組DNA與相應細胞的線粒體CoI基因保守區的基因的特異性引物進行PCR擴增,檢測方法的靈敏度;③以不同種屬細胞的線粒體CoI基因保守區的基因的特異性引物分別與多種細胞混合液提取的細胞基因組DNA進行PCR擴增,檢測細胞間的交叉污染。結果 Vero細胞、MDCK細胞及MDBK細胞線粒體CoI基因保守序列中的基因條碼序列片段大小,與來源于ATCC相應細胞系線粒體CoI基因保守序列中的基因條碼序列片段大小相符。該方法具備較好的特異性,檢測靈敏度為1.0 ng/μL,不同種屬間細胞的交叉污染可被檢出。結論該方法可有效地判斷細胞的種屬來源,亦可用于不同種屬間細胞交叉污染的分析。