特異性結(jié)合幽門螺桿菌黏附蛋白A(HpaA)核酸適配子的篩選及鑒定

摘要：目的通過指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進化技術(shù)(SELEX)篩選特異性結(jié)合幽門螺桿菌(H.pylori)黏附蛋白A(HpaA)的核酸適配子,并鑒定其結(jié)合特性。方法構(gòu)建pET28a/HpaA原核表達質(zhì)粒并誘導(dǎo)表達純化重組HpaA蛋白;以重組HpaA蛋白為靶標(biāo)利用SELEX技術(shù)篩選出能夠與HpaA具有高特異性、高親和力結(jié)合的核酸適配子。隨后利用篩選所得HpaA適配子通過體外實驗驗證與H.pylori菌體的結(jié)合以及對臨床胃黏膜切片中H.pylori的檢測效能。結(jié)果本研究培養(yǎng)并提取ATCC26695菌株基因組,通過PCR擴增HpaA部分基因長度約699 bp,并成功克隆構(gòu)建了原核表達質(zhì)粒pET28a/HpaA。經(jīng)異丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達、純化獲得純度約98%的重組HpaA蛋白作為篩選靶標(biāo)。利用SELEX技術(shù)通過10輪正向篩選和5輪的負向篩選,獲得6條與HpaA高親和力的適配子分別命名為HA1~HA6。其中適配子HA6具有較高的親和力和特異性,且適配子HA6核心序列在體外仍表現(xiàn)出與H.pylori菌體較高的結(jié)合力;利用羥基熒光素(FAM)標(biāo)記的HA6適配子對166例H.pylori感染的患者胃黏膜中H.pylori進行檢測,檢出率為94.58%,高于同批次快速脲酶檢測法的檢出率(87.95%)。結(jié)論本研究篩選出的特異性結(jié)合H.pylori菌體表面HpaA的適配子,可能作為一種新的方法應(yīng)用于胃黏膜組織中H.pylori的檢測。