單核細胞增生李斯特菌ladR基因在兩種原核表達載體中的克隆表達及純化分析

摘要：利用特異性引物擴增ladR基因序列,分別構建單核細胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)ladR基因的兩種原核表達載體,即含有6個His標簽的pET-28a-ladR表達載體和含有GST標簽的pGEX-4T-ladR表達載體。通過誘導時間、溫度和濃度優化兩種表達載體的蛋白表達條件,比較分析兩種表達載體的LadR蛋白可溶性表達水平,利用Western-Blot進行LadR蛋白表達驗證。本研究成功構建了pET-28a-ladR和pGEX-4T-ladR表達載體,在大腸桿菌BL21中分別表達出His-LadR和GST-LadR融合蛋白。通過凝血酶切除GST標簽,純化后得到LadR蛋白。在最佳表達條件IPTG為0.5 mmol/L,22℃誘導過夜下,pGEX-4T-ladR表達載體中LadR的表達量比pET-28a-ladR(IPTG為1.0 mmol/L,22℃誘導過夜)中His-LadR蛋白的表達量高4.48倍。本研究結果表明,GST標簽有利于ladR基因的可溶性表達,為后續的LadR蛋白的功能分析和轉錄調控機理研究奠定了良好基礎。