瓜實蠅熱激蛋白Hsp90基因克隆及表達分析

摘要：【目的】熱激蛋白基因Hsps在生物體抗逆性過程中具有重要的作用,本文旨在通過闡釋瓜實蠅Bactrocera cucurbitae (Coquillett)熱激蛋白基因Hsp90在其對環境溫度適應性及抗藥性過程中的功能作用,為瓜實蠅綜合治理提供理論基礎。【方法】采用RACE-PCR技術克隆瓜實蠅的Hsp90基因cDNA序列,利用生物信息學工具分析序列特征,并通過實時定量PCR技術分析高溫脅迫、阿維菌素誘導和抗性及敏感品系中該基因的表達情況。【結果】克隆獲得的瓜實蠅Hsp90基因cDNA全長2 654 bp,命名為Bc-Hsp90,GenBank登錄號為KP864677,含2 145 bp的開放閱讀框,編碼715個氨基酸蛋白,具有HSP90蛋白家族共有模式和1個基序標簽,C-末端具有MEEVD基序,屬于胞質型熱激蛋白。系統發育分析顯示,Bc-Hsp90基因高度保守。不同高溫(32-40℃)脅迫處理1 h和2 h后,瓜實蠅成蟲體內Bc-Hsp90的相對表達量均顯著高于對照組(26℃),并在38℃和40℃表達量最高;阿維菌素長期篩選的RS品系,Bc-Hsp90表達量是對照SS品系的2.13倍,但RS品系以LC90劑量誘導后,Bc-Hsp90表達量顯著下調,隨著恢復時間延長其表達量逐漸升高,96 h后恢復到對照水平。【結論】推測Bc-Hsp90在瓜實蠅耐熱性和抗阿維菌素過程中可能起著重要作用。