羊口瘡病毒青海QH02株ORF011基因的克隆、原核表達及鑒定

摘要：目的克隆羊口瘡病毒QH02株ORF011基因并進行序列分析及原核表達、鑒定。方法提取羊口瘡病毒QH02株的DNA,根據GenBank中(GU320351.1)的序列設計并合成引物,PCR擴增ORF011基因。將測序正確的序列用生物信息學軟件對其基因及蛋白的結構進行預測,并將基因構建至pET-32a(+)原核表達載體,轉化至大腸埃希菌BL21(DE3),挑取陽性克隆測序正確后用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside, IPTG)誘導表達,經十二烷基硫酸鈉-十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)、Western-blot驗證重組蛋白反應原性。結果 PCR擴增得到1 137 bp的ORF011基因片段,重組蛋白在大腸埃希菌中以包涵體的形式存在,重組蛋白相對分子質量為60×10~3,且純度較高,Western-blot檢測結果表明目的蛋白具有較好的反應原性。結論構建的原核表達系統可以成功表達B2L蛋白,經Western-blot驗證具有良好的反應原性,可作為羊口瘡防控產品研發的候選分子。