人IFN-λ1的克隆表達及其在不同種屬細胞中的抗病毒活性分析

摘要：目的測定IFN-λ1在CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK等4種不同種屬來源細胞中的抗病毒活性。方法利用RT-PCR技術從人結直腸腺癌細胞(CaCo2)中擴增獲得人IFN-λ1 (HuIFN-λ1)基因,然后克隆至真核表達載體pCDNA3.1-Flag-HA中,通過質粒轉化、陽性菌落篩選、質粒提取及測序,獲得重組質粒pCDNA3.1-HuIFN-λ1;利用脂質體將其轉染293細胞,48 h后通過Western blot檢測HuIFN-λ1瞬時表達情況,取轉染后上清分別作用于CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK等四種不同種屬來源細胞進行HuIFN-λ1抗病毒活性分析。結果從人結直腸腺癌細胞中擴增獲得HuIFN-λ1基因,大小為600 bp,并在293細胞內成功表達HuIFN-λ1,表達產物能抑制VSVG在CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK中的增殖,流式細胞儀檢測經HuIFN-λ1處理的上述細胞熒光率分別為73.69%、80.12%、71.73%、69.47%。結論重組表達的人IFN-λ1蛋白對4種不同種屬來源的細胞均存在一定的抗病毒活性,為研究人IFN-λ1在宿主抗病毒免疫和黏膜免疫中的作用機制及其應用奠定了基礎。