肺炎鏈球菌莢膜教學標本的制作方法研究

摘要：目的探索并優(yōu)化肺炎鏈球菌莢膜教學標本片的制作條件和染色過程,以期找到適合我校莢膜教學標本片需求的制作和保存方法,提升微生物實驗課堂的教學質量。方法將肺炎鏈球菌傳代活化后制成懸液,以腹腔注射法(0.2 ml懸液)感染10只昆明小鼠并傳代培養(yǎng),提取發(fā)病待瀕死小鼠的腹腔液涂片,分別使用石炭酸復紅染色法和改良Hiss莢膜染色法對其進行染色,從菌體形態(tài)、數量、莢膜大小、染色效果等方面綜合比較兩種染色方法的差異。最后將鏡檢合格的標本用中性樹膠封固,貼上標簽后保存?zhèn)溆谩Ｓ?018年12月,抽查我校2017年12月使用改良Hiss莢膜染色法所染制的35片標本片,評估標本片的質量。結果隨著傳代的進行,受染小鼠體內的肺炎鏈球菌增多,莢膜增大。傳代兩次即可見寬大的莢膜,且第二次傳代感染實驗小鼠的發(fā)病時間明顯縮短,兩次感染發(fā)病時間分別為10~12 h和8~10 h。同傳統(tǒng)的石炭酸復紅染色法比較,改良Hiss莢膜染色法所染制的標本,背景均勻,染料顆粒少,菌體呈現(xiàn)深紫色,同淡紫色背景對比明顯。同時,抽查已保存1年的改良Hiss莢膜染色法所染制的標本共35片,抽查結果表明,改良Hiss莢膜染色法制作、保存的標本莢膜仍清晰可見,無褪色和霉變現(xiàn)象,標本片完好率達到100%。結論在實際教學中,小鼠體內傳代兩次即可觀察到明顯的莢膜,改良Hiss莢膜染色法的染色效果優(yōu)于傳統(tǒng)的石炭酸復紅染色法,且封片保存的標本可反復多次使用,能滿足我校教學需要。