鼠疫一體系雙重熒光定量PCR檢測方法的建立及評價

摘要：本研究根據(jù)鼠疫耶爾森氏菌caf1及YPO0392基因,設計特異性的引物和不同熒光標記的TaqMan熒光探針,構建一體系的檢測體系,對其敏感性、特異性和穩(wěn)定性進行評價,并對8份鼠疫陽性及24份陰性DNA樣本進行應用評價。結果顯示,一體系雙重檢測鼠疫DNA的敏感度為17.93×10^-5 ng/μL;19份鼠疫菌DNA都有擴增,25份非鼠疫菌DNA都未擴增;對8份陽性現(xiàn)場DNA樣本進行檢測,一體系檢測結果均為陽性;對24份陰性DNA樣本進行檢測,結果均為陰性。結果表明,本研究成功建立了可同時檢測鼠疫耶爾森氏菌caf1和YPO0392基因的一體系雙重熒光定量PCR方法,具有良好的敏感性與特異性,操作方便并節(jié)約成本,能夠代替單基因檢測方法。