枯草芽孢桿菌Expansin蛋白的原核表達(dá)及活性分析

摘要：目的原核表達(dá)枯草芽孢桿菌Expansin蛋白,并分析其促進(jìn)多糖糖化的活性。方法以過(guò)夜培養(yǎng)的Bacillus subtilis subsp. Subtilis subtilis str. 168基因組為模板合成expansin基因;在引物的N-端添加6-his tag,PCR合成融合基因6his-expansin,構(gòu)建重組質(zhì)粒6his-expansin-6his-p ET28a(+)[heh-pET28a(+)],轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白6His-Expansin-6His(HEH);并對(duì)表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化。產(chǎn)物經(jīng)Ni-NTA純化,檢測(cè)其與多糖降解酶(polysaccharide degrading enzyme,PDE)(纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶)及多糖復(fù)合酶(polysaccharide complex enzyme,PCE)制劑的協(xié)同活性(synergistic activity,SA)。結(jié)果經(jīng)雙酶切鑒定,重組質(zhì)粒heh-p ET28a(+)構(gòu)建正確;融合蛋白HEH在0. 05 mmol/L IPTG 30℃誘導(dǎo)30 h的最適表達(dá)條件下,表達(dá)量約為1. 2 mg/m L,其相對(duì)分子質(zhì)量為26 400,目的蛋白純度達(dá)95%;該蛋白與纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶的SA分別為171. 53%、61. 95%、230. 00%,與PCE降解濾紙(filter paper)、秸稈(rice straw)的SA分別為312. 83%、356. 59%。結(jié)論重組的融合蛋白HEH與PDE均具有較高的協(xié)同作用,為Expansin在生物質(zhì)木質(zhì)纖維素糖化領(lǐng)域的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。