利用CRISPR-Cas9敲除Tyr基因制作白化C57BL/6N小鼠

摘要：目的 為了獲得白化的C57BL/6N小鼠,擴(kuò)大其在皮膚移植和胚胎干細(xì)胞方面研究中的應(yīng)用。方法 通過體外設(shè)計(jì)合成Cas9 mRNA和系列sgRNA(single guide RNAs),注射到小鼠的受精卵內(nèi),破壞合成C57BL/6N小鼠黑色素生成必須的酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)基因序列的第1和第2外顯子,產(chǎn)生基因突變,獲得F0代白化的C57BL/6N小鼠,然后經(jīng)過重復(fù)回交和自交,形成白化C57BL/6N小鼠近交系。結(jié)果 經(jīng)過注射兩對(duì)sgRNA,成功的獲得了F0代的白化小鼠,在Tyr基因的第1和第2外顯子中均發(fā)生了缺失突變,小鼠可以將突變基因傳遞給后代,并在其后代中產(chǎn)生了純合的白色C57BL/6N小鼠,最后對(duì)白化小鼠突變類型進(jìn)行了分析。結(jié)論 通過CRISPR-Cas9技術(shù)破壞了小鼠Tyr基因,成功地建立了白化C57BL/6N小鼠近交系,為將來的嵌合體制作、組織移植提供了新的研究工具。