雞堆型艾美耳球蟲gam56基因的克隆及其表達產物的免疫原性分析

摘要：為了研究堆型艾美耳球蟲gam56基因的功能,提取堆型艾美耳球蟲(揚州株)卵囊DNA,應用PCR擴增gam56基因,克隆至pGEM-T-Easy載體;測序、密碼子優化后連接至pET-28a質粒,構建pET-28aEagam56表達載體,轉化至大腸桿菌BL21;重組菌經酶切和測序鑒定后誘導表達,對表達產物進行SDS-PAGE分析和Western-blot鑒定。結果顯示:gam56基因全長1 323 bp,編碼440個氨基酸;重組蛋白大小約49 ku,以可溶蛋白形式為多,能被組氨酸單抗特異性識別;該重組蛋白能被小鼠抗重組蛋白多克隆抗體以及雞抗堆型艾美耳球蟲、雞抗毒害艾美耳球蟲、雞抗巨型艾美耳球蟲和雞抗柔嫩艾美耳球蟲的陽性血清特異性識別。本研究結果為進一步探析堆型艾美耳球蟲gam56基因功能與研制雞球蟲病基因工程疫苗奠定了基礎。