過表達TPL2蛋白BHK21細胞系的建立及其初步應用

摘要：利用慢病毒表達系統將TPL2(COT和MAP3K8)質粒穩定整合在乳倉鼠腎細胞(baby Hamster Syrian kidney)BHK21細胞基因組染色體上,建立穩定表達TPL2的BHK21/TPL2細胞系。構建TPL2質粒,通過基因合成將TPL2基因和慢病毒載體Lv-PCDH連接,得到重組慢病毒載體Lv-TPL2。通過嘌呤霉素篩選得到的陽性細胞株BHK21/TPL2即為穩定表達TPL2蛋白的BHK21細胞株。運用間接免疫熒光、激光掃描共聚焦顯微技術、實時熒光定量PCR和普通PCR等技術分別驗證TPL2基因組整合、轉錄、反應活性以及FMDV、SVV在BHK21/TPL2細胞株上的增殖效果。結果,TPL2基因被穩定整合在BHK21細胞基因組染色體上,建立的細胞系連續傳代不丟失。接種病毒后致細胞病變嚴重,相對于正常的BHK21/PCDH細胞,整合有TPL2的BHK21細胞對FMDV、SVV的易感性顯著增強。上述結果為FMDV疫苗的研制和生產提供了更佳的功能細胞系。