犬圓環病毒Rep基因SYBR GreenⅠreal-time PCR方法的建立及應用

摘要：為建立一種檢測犬圓環病毒的快速診斷方法,本試驗擬采用普通PCR方法擴增犬圓環病毒Rep基因,將目的基因克隆到T-Vector pMD19 (Simple),以測序正確的重組質粒作為模板,建立針對犬圓環病毒Rep基因的SYBR GreenⅠreal-time PCR檢測方法,并對該方法進行敏感性、特異性和重復性試驗。結果顯示,Ct值與標準品在6.18×10^9~6.18×10^2copise/μL范圍內呈良好的線性關系,其相關性為0.998,斜率為-3.671。檢測下限為6.18×10^1copies/μL,且對豬圓環病毒2型、豬圓環病毒3型、犬瘟熱病毒、犬傳染性肝炎病毒、犬細小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型、狂犬病病毒等均無特異性擴增,所有稀釋度標準品模板均在86.45℃出現特異性熔解峰。通過對臨床樣品進行檢測,本方法對犬圓環病毒核酸的檢出率為9.72%(7/72)。結果表明,本試驗成功建立了針對犬圓環病毒Rep基因的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,可實現對犬圓環病毒快速、靈敏及準確的診斷。