北京鴨肝間充質干細胞分離、培養及分化潛能研究

摘要：試驗旨在研究北京鴨肝間充質干細胞(liver mesenchymal stem cells,LMSCs)的分離、培養、鑒定及多向分化潛能等生物學特性。取孵化19日齡健康鴨胚通過酶消法分離出北京鴨LMSCs,進行體外培養,通過免疫熒光、RT-PCR和流式細胞術等技術對北京鴨LMSCs特異性標記物(CD29、CD44、CD71、CD73、CD90、CD105、CD133及CD166)進行檢測,因北京鴨LMSCs分離過程中會存在少量造血干細胞,所以對造血干細胞特異性標記物CD31、CD34進行檢測,同時對細胞進行成脂和成骨的分化誘導,檢測其多向分化潛能。結果顯示,通過酶消法獲得的北京鴨LMSCs具有間充質干細胞特異性標記物,造血干細胞特異性標記物為陰性表達,證明其為肝間充質干細胞,且向成脂肪細胞和成骨細胞分化誘導。RT-PCR檢測結果發現,成脂分化誘導中,過氧化物酶體增殖因子活化受體-γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPAR-γ)、脂蛋白酶(lipoprotein lipase,LPL)呈陽性表達;成骨分化誘導中,Ⅰ型膠原蛋白(CollagenⅠ)和Runt相關轉錄因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)呈陽性表達。北京鴨LMSCs較強的自我增殖能力可使畜禽遺傳資源有無限利用的可能性,多向分化潛能強則說明重編程的水平較低,對畜禽種質資源的復原有巨大的優勢,為組織再生研究提供了一定的理論基礎,對于畜禽資源的開發與利用打開了一個更為寬廣的平臺。