犬左室三層細(xì)胞的分離和電生理記錄

摘要：目的探討分離耐鈣犬左室三層細(xì)胞的方法,并利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)進(jìn)行電生理記錄。方法采用改良的Langendorff灌流裝置,經(jīng)主動(dòng)脈左冠竇插管灌流帶有左室前降支的犬心肌組織塊,分離出單個(gè)耐鈣心室肌細(xì)胞。先根據(jù)解剖部位將心室肌細(xì)胞分為內(nèi)、中、外三層;再采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù),在電流鉗模式下,各層隨機(jī)選取8個(gè)細(xì)胞記錄動(dòng)作電位(AP)、快激活延遲整流鉀電流(IKr)、慢激活延遲整流鉀電流(IKs)、晚鈉電流(INa-L),分析三層的心室肌細(xì)胞的電生理特性。結(jié)果分離狀態(tài)良好的單個(gè)心室肌細(xì)胞率為90%以上,呈桿狀,表面光滑,橫紋清晰,邊緣銳利,靜止不動(dòng);內(nèi)層(Endo)心室肌細(xì)胞沒有尖峰-圓頂樣形態(tài),動(dòng)作電位復(fù)極90%的時(shí)程(APD90)最短;中層(Mid)心室肌細(xì)胞也有尖峰-圓頂樣形態(tài),但不如外層(Epi)細(xì)胞明顯,APD90最長(zhǎng);Epi心室肌細(xì)胞有明顯的尖峰-圓頂樣形態(tài),APD90介于Mid與Endo之間。在-30 mV電壓下,Mid細(xì)胞INa-L電流密度較Endo、Epi的電流密度稍大,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;三層細(xì)胞IKr的電流密度無明顯差異;Mid細(xì)胞的IKs的電流密度在三層心肌細(xì)胞中最小,Endo、Epi中無明顯差異。結(jié)論該方法更加易于操作,節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本和時(shí)間,分離的細(xì)胞數(shù)量多、活性高;結(jié)合解剖部位和電生理特點(diǎn),能有效鑒別各層心室肌細(xì)胞;成功分離出細(xì)胞,可用于離子通道特性的研究。