豬流行性腹瀉病毒IgA抗體間接ELISA方法的建立

摘要：為建立檢測豬流行性腹瀉病毒(PEDV)血清特異性IgA抗體的間接ELISA方法,本研究利用融合PCR的方法,將PEDV G2型LNct2a株S蛋白的S1基因片段與人源IgG分子的Fc基因片段融合,克隆于真核表達質粒pAAV-IRES-hr GFP中,構建真核表達質粒pAAV-LNCT2-S1-Fc并轉染293T細胞,表達并純化了S1蛋白。以純化的S1蛋白作為包被抗原,以羊抗豬IgA-HRP為二抗,通過優化反應條件,建立了檢測PEDV G2型特異性IgA抗體的間接ELISA方法,并對該方法進行了特異性、敏感性及重復性試驗。特異性試驗結果顯示該方法對豬傳染性胃腸炎病毒、輪狀病毒、豬德爾塔冠狀病毒和圓環病毒的陽性血清均無交叉反應;敏感性試驗結果顯示該方法能夠檢測出400倍稀釋的陽性血清;批內和批間重復性變異系數均小于10%。利用該間接ELISA方法和間接免疫熒光方法(IFA)同時對臨床樣品檢測,結果顯示二者總符合率為98.6%。本研究建立的ELISA方法特異性強、敏感性高、重復性好,能夠用于檢測及評價血清中PEDV特異性IgA抗體的水平,為PEDV流行情況及免疫效果評價提供了有效的手段。