鱖彈狀病毒TaqMan熒光定量PCR檢測方法的建立及應用

摘要：為建立快速、準確檢測鱖彈狀病毒(SCRV)的TaqMan熒光定量PCR方法,本實驗根據彈狀病毒N基因中的保守序列,設計合成了一對特異性引物和TaqMan探針,以構建的標準質粒為模板,經條件優化后建立了SCRV的TaqMan熒光定量PCR檢測方法,并對該方法的特異性、敏感性和重復性進行試驗。結果顯示,建立的TaqMan熒光定量PCR檢測方法標準曲線的相關系數為0.999,質粒標準品在1×10~8拷貝/μL~1×10~1拷貝/μL范圍內有較好的線性關系;該方法可以特異性檢測SCRV,但對草魚出血病病毒(GCRV)、錦鯉皰疹病毒(KHV)、羅非魚湖病毒(TiLV)、石斑魚虹彩病毒(SGIV)、傳染性脾腎壞死病(ISKNV)、神經壞死病毒(NNV)及鯉春病毒血癥病毒(SVCV)等7種常見魚類病毒檢測結果均為陰性;最低可檢測到的質粒標準品濃度為102拷貝/μL,比常規PCR方法靈敏100倍;該方法組內與組間變異系數均小于2%。采用該方法對35份臨床樣品進行檢測,結果顯示陽性檢出率為31%,而普通PCR陽性檢出率為14%,該方法檢出率比常規PCR高。本研究建立的SCRV的TaqMan熒光定量PCR檢測方法為SCRV的快速檢測提供了可行的技術手段。