H7N9禽流感DNA疫苗的免疫保護效力研究

摘要：為檢測H7N9禽流感病毒(AIV) DNA疫苗的免疫保護效力,本研究將H7N9禽流感疫苗株A/Chicken/Guangxi/SD098/2017 (H7N9)[CK/GX/SD098/17 (H7N9)]的HA基因密碼子優化后,定向克隆至載體pCAGGS中構建重組質粒pCA-SD098。將pCA-SD098轉染至293T細胞后,采用間接免疫熒光(IFA)和western blot檢測,結果顯示,HA蛋白可以在293T細胞中正確表達。分別利用15μg和20μg重組質粒pCA-SD098免疫3周齡SPF雞,3周后以相同的劑量和方式加強免疫,加強免疫一周后通過鼻腔分別感染105EID50的同源高致病性AIV (HPAIV)CK/GX/SD098/17 (H7N9)和異源低致病性AIV (LPAIV) A/Chicken/Chongqing/SD057/2017 (H7N9)[CK/CQ/SD057/17 (H7N9)],攻毒10 d內記錄免疫雞發病和死亡情況,檢測免疫雞HI抗體水平,并于攻毒后第3 d、第5 d和第7 d無菌采集所有雞的喉頭和泄殖腔拭子,采用紅細胞凝集試驗(HA)檢測病毒的滴度。結果顯示,重組質粒pCA-SD098免疫后可以誘導SPF雞產生較高水平的HI抗體,15μg pCA-SD098劑量免疫雞后能夠完全抵御H7N9 HPAIV的致死性攻擊,20μg pCA-SD098劑量可以有效阻斷H7N9 LPAIV的感染。攻毒后,所有免疫雞無發病、無死亡、無排毒,本研究為質粒pCA-SD098作為防控H7N9禽流感的候選DNA疫苗提供了實驗依據。