豬流行性腹瀉病毒單克隆抗體的制備及膠體金免疫層析檢測方法的建立

摘要：為了建立快速檢測豬流行性腹瀉病毒(PEDV)的膠體金免疫層析方法(GICA),本研究用PEDV免疫BALB/c小鼠,制備雜交瘤細胞。分別采用間接ELISA和表面熒光吸附法(CSFIA)篩選,共得到33株能夠穩定分泌抗PEDV單克隆抗體(MAb)的雜交瘤細胞株。通過制備小鼠腹水并純化后測得其中21株細胞分泌的MAb的ELISA效價在1∶1.6×104以上,且均僅與PEDV反應,不與TGEV和PRV反應,特異性較強。采用雙抗體夾心ELISA法篩選出能夠配對檢測PEDV的MAb有5株,以其中的4H7為檢測抗體、5A9為俘獲抗體初步建立了檢測PEDV的GICA。該GICA特異性試驗結果顯示,除了PEDV檢測結果為陽性外,該方法對偽狂犬病病毒、豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒和傳染性胃腸炎病毒的檢測結果均為陰性,特異性較強;該方法針對PEDV的最低檢測限為7.8×103TCID50/mL,敏感性較高;批內和批間重復性檢測樣品結果無明顯差異,具有較好的重復性;將該方法和RT-PCR方法同時檢測115份臨床樣品,該方法與RT-PCR陽性符合率為93%。本實驗制備的PEDV MAb,以及基于該AMbs初步建立的檢測PEDV的GICA為開發快速檢測PEDV的膠體金免疫層析試紙條奠定了基礎。