實時熒光PCR檢測巴西孢子絲菌的實驗方法的建立

摘要：目的建立一種快速、特異、靈敏的熒光PCR方法檢測巴西孢子絲菌。方法比對NCBI數據庫中所有巴西孢子絲菌內轉錄間隔區(internal transcribed spacer,ITS)序列,在保守區域設計并合成特異性引物和探針,建立并優化熒光PCR檢測方法。對優化后的方法使用標準濃度核酸進行擴增效率、靈敏度及特異度評價。通過巴西孢子絲菌小鼠感染模型,與組織培養比較,對本研究中的方法進行評價。結果建立的實時熒光PCR方法對巴西孢子絲菌的檢測限為100fg。該方法對申克孢子絲菌、球形孢子絲菌、其他常見致病真菌28種、常見細菌3種以及人類基因組和小鼠基因組擴增結果均為陰性,特異度為100%。對巴西孢子絲菌感染小鼠腦、肝、肺、脾、腎及淋巴結檢測與培養結果相一致。結論本研究建立的熒光PCR方法可快速、靈敏、特異地鑒定巴西孢子絲菌,并能夠有效的對感染小鼠模型標本進行檢測,有助于孢子絲菌病的早期特異性病原學診斷。