低密度cDNAMacroarray對干擾素α抗病毒蛋白的篩選

摘要：目的 基于低密度cDNAMacroarray技術篩選出差異表達的干擾素（IFN）僅抗病毒基因，以探討IFNα抗病毒蛋白的表達與HBV復制的關系。方法以一定濃度的IFNa處理肝胚瘤細胞株HepG2和HepG2．2．15細胞6h，用cDNAMacroarray分析比較兩細胞株IFN僅抗病毒基因表達譜，并篩選出差異表達的IFNa抗病毒基因。將表達HBV核心蛋白（HBc）的質粒DHBc-EGFP轉染HepG2細胞，RT-PCR法分析HBc對IFN僅抗病毒基因表達的影響。將表達抗黏病毒A蛋白（MxA）的表達質粒pcDNA3．1Flag-MxA轉染HepG2．2．15，以酶聯免疫吸附試驗、Dotblot、Southernblot等方法分別檢測HepG2．2．15細胞表達釋放的HBsAg與HBeAg、細胞外HBVDNA和細胞內HBVDNA復制中間體（松弛環狀DNA、雙股線性DNA），以判斷HBV復制情況。兩組間數據比較采用t檢驗，組間不同時間點數據比較采用單因素方差分析。結果cDNAMacroarray分析顯示HepG2和HepG2．2．15細胞的抗病毒基因表達譜具有差異性：IFNa抗病毒基因中干擾素誘導跨膜蛋白（IFITM）1、IFITM2、IFITM3、RING4等在HepG2．2．15細胞的表達被部分抑制，而重要的抗病毒蛋白MxA表達被完全抑制。HBc轉染組細胞中MxAmRNA表達的相對水平為0．31±0．05，低于空白對照組的0．74±0．04，差異有統計學意義，P〈0．05。MxA蛋白轉染HepG2．2．15細胞48、72h后，MxA轉染組細胞上清液中HBsAg的S／CO值分別為1．42±0．21和1．58±0．18，HBeAg的s／co值為1．44±0．14和2．28±0．24，而空白對照組細胞上清液中HBsAg的S／CO值為1．92±0．19和2．79±0．25，HBeAg的S／CO值為2．31±0．46和3．37±0．29，兩組細胞上清液中HBV抗原的s／CO值差異均有統計學意義，P值均〈0．05。細胞外HBVDNA、胞內HBV復制中間體DNA均無明顯變化。結論HBV及其抗原成分的復制和表達影響著IFNa抗病毒蛋白的表達；HBV通過抑制IFNd抗病毒蛋白的表達而發揮拮抗IFNa的抗病毒活