miRNA-1236通過(guò)靶向FOXO3a調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的作用及機(jī)制研究

摘要：目的探討miRNA-1236對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的作用及其相關(guān)機(jī)制。方法通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR-1236后miRNA-1236的表達(dá),使用CCK-8以及克隆形成方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染miRNA-1236后HCT116細(xì)胞的活性,ki67方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染miRNA-1236后HCT116細(xì)胞增殖能力的變化,生物信息方法篩選miR-1236的潛在靶基因FOXO3a。Luciferase報(bào)告檢測(cè)miRNA-1236與FOXO3a的結(jié)合位點(diǎn),通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染miRNA-1236后FOXO3a基因的變化;通過(guò)免疫組化的方法檢測(cè)結(jié)直腸癌患者組織中FOXO3a的表達(dá),通過(guò)western blot檢測(cè)低表達(dá)miRNA-1236后HCT116細(xì)胞中FOXO3a、PCNA以及Bax蛋白的變化。通過(guò)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)檢測(cè)FOXO3a基因在結(jié)直腸癌患者癌-癌旁,不同腫瘤階段與不同性別中的表達(dá)。結(jié)果本研究發(fā)現(xiàn)高表達(dá)miRNA-1236后HCT116細(xì)胞活性相對(duì)于陰性對(duì)照組明顯增加,而低表達(dá)miRNA-1236后活性降低。低表達(dá)miRNA-1236后HCT116細(xì)胞增殖能力相對(duì)于陰性對(duì)照組明顯降低。生物信息學(xué)預(yù)測(cè)miR-1236與FOXO3a有潛在的結(jié)合位點(diǎn)。采用Western blot以及逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證,過(guò)表達(dá)miRNA-1236后FOXO3a表達(dá)相對(duì)于陰性對(duì)照組明顯降低,而低表達(dá)miRNA-1236后,FOXO3a表達(dá)明顯升高,同時(shí)luciferase結(jié)果顯示,FOXO3a是miRNA-1236的靶基因。并且,FOXO3a在結(jié)直腸癌癥組織中明顯降低。結(jié)論miR-1236通過(guò)靶向FOXO3a的表達(dá)調(diào)節(jié)結(jié)直腸癌細(xì)胞HCT116增殖,同時(shí)為miR-1236成為診斷、預(yù)防以及治療結(jié)直腸癌的生物學(xué)標(biāo)記物提供理論基礎(chǔ)。