抑制miR-134治療大鼠癲癇持續狀態實驗研究

摘要：目的探討微小核糖核酸-134（miR-134）在癲癇持續狀態發生中的作用。方法 （1）構建大鼠miR-134抑制慢病毒載體;（2）建立大鼠氯化鋰-匹羅卡品癲癇持續狀態模型,觀察miR-134抑制對大鼠發作潛伏期,癲癇持續狀態時間,發作嚴重程度,腦電圖功率以及海馬神經元凋亡的影響。結果（1）將一段362 bp的包含2個miR-134競爭結合位點的脫氧核糖核酸（DNA）片段經Xho I和EcoRI酶切后插入質粒p CDH-CMV-MCS-EG（R）FP-MCS中EG（R）FP序列的下游,該片段轉錄產物與miR-134互補形成穩定的復合物,從而阻止了miR-134對靶信使核糖核酸（mRNA）的降解或翻譯抑制,得到大鼠miR-134抑制慢病毒載體。（2）立體定向注射miR-134抑制慢病毒于大鼠海馬并放置海馬電極,2 w后建立氯化鋰-匹羅卡品大鼠癲癇持續狀態模型,進行腦電圖監測,結果提示miR-134抑制慢病毒組較相應對照病毒組Ⅴ級發作潛伏期延長（P〈0.01）,腦電圖總功率降低（P〈0.001）,癲癇持續狀態時間縮短（P〈0.05）。癲癇持續狀態后3 d制備腦片進行免疫熒光染色,結果提示miR-134抑制慢病毒組海馬齒狀回（DG）、CA1及CA3區較相應對照病毒組神經元核（Neu N）染色陽性細胞數增多,末端脫氧核苷酸轉移酶介導的生物素脫氧尿嘧啶核苷酸缺口末端標記（TUNEL）陽性細胞減少。結論抑制大鼠海馬miR-134能夠減輕癲癇持續狀態發作并具有神經保護作用。