單純皰疹病毒2型潛伏感染激活模型的建立及潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄子開放讀碼框架抑制后對潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄子基因表達(dá)的影響

摘要：目的 研究單純皰疹病毒2型（HSV-2）潛伏感染激活中潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄子（LAT）開放讀碼框架（ORF）抑制后對LAT基因表達(dá)的影響。方法 建立HSV-2潛伏感染復(fù)發(fā)的神經(jīng)細(xì)胞（SHSY5Y）模型。運(yùn)用相差顯微鏡觀察HSV-2潛伏及激活后SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)的變化。對病毒在細(xì)胞中的潛伏及激發(fā)進(jìn)行PCR驗(yàn)證并測序。設(shè)計(jì)3對siRNA，激活誘導(dǎo)后轉(zhuǎn)染SH-SYSY細(xì)胞，相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，RT-PCR半定量檢測轉(zhuǎn)染前后LAT ORF表達(dá)的改變。結(jié)果在存在60 μmol/L阿昔洛韋（ACV）的環(huán)境，HSV-2在SH-SY5Y細(xì)胞中建立潛伏狀態(tài)。病毒在SH-SY5Y細(xì)胞中最長可潛伏14d。43℃ 1.5 h誘導(dǎo)病毒潛伏激發(fā)，而相差顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，病毒激發(fā)后細(xì)胞病變從24h到72 h，細(xì)胞變性、壞死的程度、數(shù)量隨感染時間延長而增加。HSV-2 LAT、糖蛋白G（gG）基因PCR擴(kuò)增及電泳結(jié)果證實(shí)病毒在細(xì)胞中的潛伏及激活。LAT ORF-siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，LAT ORF mRNA的表達(dá)水平在轉(zhuǎn)染后24、36和48 h分別減少了39％、51％和60％。結(jié)論 抑制LAT ORF后能夠抑制HSV-2 LAT基因的表達(dá)，為進(jìn)一步研究LAT ORF在病毒潛伏感染復(fù)發(fā)中的作用提供了依據(jù)。